核酸純化的方法及原理
更新時間:2022-08-19 點擊次數:1672
核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎,核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的最重要因素,也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。
核酸純化的方法及原理如下:
一、PC抽提法
PC 抽提是去除蛋白質有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質不會被一次去除,必須靠多次抽提,方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質難以*去除,以及基因組 DNA 會斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個用途是,利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點,在 RNA 抽提時獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質之前,是不能使用 PC 抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提最大的優勢是成本低廉,對實驗條件要求較低,對于經費緊張的實驗室較為實用。
二、高鹽沉淀法
高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法,同樣也是一個非常不錯的方法。與 PC 抽提方法相比,除了純度的穩定性可能要低一點外,該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點。更快、更輕松的去除蛋白質所可以用于大規模抽提,但其不足之處是純度 (蛋白質殘留) 不夠穩定,蛋白質的沉淀效率在4℃會更好一些。
三、離心柱法
離心柱純化法,是目前試劑盒提取廣泛應用的方法。其最大特點是受人為操作因素影響小,純度的穩定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進入另外一個離心管中,與含有核酸的柱子*是分開的,所以洗滌更*。其致命弱點是樣品過量,提取效率較低,且需要反復離心,操作復雜,成本也較高。
四、生物磁珠法
生物磁珠法是將純化介質包被在納米級生物磁珠表面,通過介質對核酸的吸附,在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動,從而達到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比,生物磁珠法具有很多的優勢,如:
①提取靈敏度高(微量材料即可提取)
②純化純度高(*與蛋白鹽等雜質分離)
③提取產量高(每mg磁珠能吸附500ug DNA)